Inserto este interesante artículo científico suscrito por
diferentes especialistas que trabajan sobre el virus Ébola, surgido
recientemente en países del Africa Central. Muchas dudas quedan flotando en la
comunidad internacional sobre el virus mismo. Se hace necesario contar con
información científica consistente que permita entender sobre sus
características y tratamiento, sobre todo si en definitiva se puede producir
vacunas o tratamientos que permitan detener su propagación mundial. Los autores
sostienen que este brote es atípico respecto al aparecido en Zaire y las
pruebas de la patologia en ratones ha mostrado que exhiben distintos fenotipos de la
enfermedad después de la infección del virus, lo cual señala excelentes
posibilidades para tratamientos y definitiva curación, aunque la fase de prueba
en humanos deberá esperar aún por resultados óptimos.
![](https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgGw900ORhny6_oXUk2kcGWTWp7j9a4axSTuct1Kk7n6Ci3aLnDQeGLUA5eNcuX-9KNTJBHOifhjfL7XTdCN7puawhIRCzcR0K7M7A6CHqA48nXFoT1l3_6DbGOntpN9ekvN_Xj7I2Jjc92/s1600/Escribe.jpg)
Angela L. Rasmussen*,1, Atsushi Okumura*,1,4, Martin
T. Ferris2, Richard Green1, Friederike
Feldmann3,Sara M. Kelly1, Dana P.
Scott3, David Safronetz4, Elaine
Haddock4, Rachel LaCasse3, Matthew
J. Thomas1,Pavel Sova1, Victoria
S. Carter1, Jeffrey M. Weiss1, Darla
R. Miller2, Ginger D. Shaw2, Marcus
J. Korth1,Mark
T. Heise2,5, Ralph
S. Baric5, Fernando Pardo Manuel de
Villena2, Heinz Feldmann4, Michael
G. Katze1,† Estos autores contribuyeron
igualmente a este trabajo.
Tomado
de la sección informativa Revista Science. 30 octubre 2014.
Abstrac
Los
modelos existentes de ratón de la infección por el virus del Ébola letal no se
reproducen los síntomas característicos de la fiebre hemorrágica del Ébola, ni
retraso en la coagulación de la sangre y la coagulación intravascular
diseminada, ni la muerte de choque, lo cual se restringe estudios de
patogénesis a los primates no humanos . Aquí nos muestran que los ratones de la
Cruz de Colaboración exhiben distintos fenotipos de la enfermedad después de la
infección del virus del Ébola adaptada a ratón. Fenotipos van desde una
resistencia completa a la enfermedad letal para la fiebre hemorrágica severa se
caracteriza por tiempos de coagulación prolongados y una mortalidad del 100 %.
La señalización inflamatoria se asocia con la permeabilidad vascular y la activación
endotelial, y la resistencia a la infección letal surgió por la inducción de la
diferenciación de linfocitos y la adhesión celular, probablemente mediada por
el alelo de susceptibilidad Tek. Estos datos indican que los antecedentes
genéticos determina la susceptibilidad a la fiebre hemorrágica del Ébola
Una cepa adaptada a ratón de virus de Ébola (MA- EBOV) no causa síndrome hemorrágico a pesar de causar enfermedad mortal en ratones de laboratorio, y no puede ser utilizado eficazmente para estudiar fiebre hemorrágica del Ébola (EHF) patogénesis, como la disimilitud a la enfermedad humana limita la capacidad para identificar correlatos clave de la patogénesis viral o evaluar con precisión el efecto de las vapcunas o agentes terapéuticos. Estudios de patogénesis de la EHF por lo tanto se han limitado a los macacos (1-4), cobayas (5,6) , y los hámsters sirios (7). Aunque estos modelos recapitulan con precisión la mayoría de las características de la enfermedad de la EHF, preocupaciones prácticas y éticas limitan su uso, incluyendo fondos no reproducibles genéticos, el costo, la disponibilidad de animales, y la disponibilidad de reactivos. Los estudios epidemiológicos de la infección EBOV han identificado una gama de fenotipos patógenos, que no están vinculados a las mutaciones específicas en el genoma viral (8,9) . Esto sugiere que la respuesta del huésped puede determinar la gravedad de la enfermedad después de la infección EBOV.
Para
determinar la línea de base fenotípica, desafiamos a los ocho fundadores CC por
vía intraperitoneal con MA- EBOV o la cepa Mayinga de tipo salvaje EBOV ( WT-
EBOV ). MA- EBOV difiere de la secuencia WT- EBOV publicada por sólo 13 cambios
de nucleótidos, tres de los cuales están en silencio (14) . MA- EBOV es
patógeno en los conejillos de indias y los macacos (1), y hace que la EHF letal
en hámsters sirios (7). A pesar de la observación de 25 a 100 % de mortalidad
desafío siguiente MA- EBOV en dosis múltiples (fig. S1), que no encontró
ninguna evidencia de enfermedad hemorrágica o la susceptibilidad a la
enfermedad después de la infección letal con WT- EBOV . Se evaluó el fenotipo
patogénico producida por la infección intraperitoneal con 100 unidades
formadoras de focos ( FFU) de MA- 47 disponibles en EBOV líneas CC- RIX (Tabla
1). Observamos fenotipos de la enfermedad que van desde la resistencia completa
a la enfermedad letal a grave patología EHF - asociado antes de la muerte , así
como las líneas que la infección letal sin síntomas de la EHF, pero a veces
con decoloración hepática.
Tabla1. Distribución de los fenotipos a través de líneas de CC- RIX . La negrita indica cruces CC- RIX utilizados en este estudio .
Resultado
|
Frecuencia
|
Características
|
CC-RIX line ID
|
Mortalidad (%)
|
de la infeción
|
de fenotipo (%)
|
fenotípicas
|
|
|
Resistencia
|
19 (9/47)
|
0% mortalidad
|
15156x1566
|
0
|
|
|
|
3252x8042
|
0
|
|
|
|
5119x8018
|
0
|
|
|
|
3252x8002
|
0
|
|
|
|
8034x8048
|
0
|
|
|
|
8048x8026
|
0
|
|
|
|
8026x5080
|
0
|
|
|
|
1566x8043
|
0
|
|
|
|
16012x15119
|
0
|
Parcialmente
|
11 (5/47)
|
>50%
mortalidad
|
18042x3032
|
20
|
resistente
|
|
|
15156x3252
|
20
|
|
|
|
477x16912
|
40
|
|
|
|
13140x16680
|
20
|
|
|
|
16072x15119
|
20
|
Letal
|
17 (8/47)
|
>50%
mortalidad
|
3032x16188
|
80
|
|
|
|
8004x8043
|
60
|
|
|
|
8002x3032
|
60
|
|
|
|
16188x8005
|
100
|
|
|
|
8008x8016
|
100
|
|
|
|
16441x8024
|
100
|
|
|
|
16912x5489
|
100
|
|
|
|
3415x16012
|
100
|
Letal con
|
19 (9/47)
|
>50% mortalidad, decoloración hepática
|
8042x16513
|
60
|
hepatitis
|
|
|
16513x15156
|
100
|
|
|
|
16188x3252
|
75
|
|
|
|
13067x16912
|
100
|
|
|
|
5489x16557
|
80
|
|
|
|
16912x16211
|
60
|
|
|
|
16211x13140
|
80
|
|
|
|
8024x8049
|
100
|
|
|
|
8049x8010
|
100
|
Letal con EHF
|
34 (16/47)
|
>50% mortalidad
coagulopatía grave ( sangre descolorida, prolongada
coagulación de la sangre )
|
3609x5119
|
60
|
|
|
|
8018x3154
|
80
|
|
|
|
13140x3015
|
100
|
|
|
|
8016x8034
|
100
|
|
|
|
16441x8005
|
100
|
|
|
|
8010x16441
|
100
|
|
|
|
3032x16441
|
60
|
|
|
|
8005x8002
|
100
|
|
|
|
3154x3609
|
100
|
|
|
|
3609x5489
|
100
|
|
|
|
16557x13067
|
100
|
|
|
|
16513x16188
|
100
|
|
|
|
15155x8054
|
100
|
|
|
|
3393x8052
|
100
|
|
|
|
8043x8008
|
80
|
|
|
|
8048x15155
|
80
|
Hemos
realizado estudios detallados sobre dos líneas representativas, 13140x3015
(susceptibles a la EHF letal) y 15156x1566 (resistente a la enfermedad letal ).
Los ratones de ambas líneas perdieron aproximadamente el 15 % de su peso
corporal durante los primeros cinco días después de la infección (pi) (fig.
1A). Sin embargo, los ratones susceptibles sucumbieron a la infección letal en
los días 5-6 del pi, mientras que los ratones resistentes sobrevivió y se
recuperó completamente de peso corporal el día 14 (Fig . 1B ) . En el día 5 pi,
los ratones susceptibles presentó los hallazgos patológicos consistentes con
EHF, incluyendo prolongada coagulación de la sangre, hemorragia interna , la
sangre de color café, esplenomegalia, y la decoloración hepática y la textura
suavizado (Fig. 1C). Los ratones resistentes, sin embargo, no tenían patología
macroscópica evidente al momento de máxima pérdida de peso corporal y ninguna
alteración en la apariencia del hígado (Fig.1D). Ninguno de los dos ratones
susceptibles ni resistentes desarrollaron la enfermedad clínica observable
después de la provocación con WT- EBOV. Hemos detectado extremadamente bajos
títulos de virus en el día 3 en el hígado y el bazo de los animales después de
la infección WT- EBOV, y estos eran 100-1000 veces más bajos que los títulos de
órganos detectados en ratones infectados con MA- EBOV (fig. S2). No se detectó
el virus en el día 5 en cualquier órgano o cualquier ratón, lo que indica que
el WT- EBOV no es capaz de replicarse productivamente en estas cepas de ratón.
![](https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjEBdg46USwbbzc0t2azGVvwuPE9bqfO4qCo0hh48kv8aFWej7MWmmChJqapAKho9wtT4LpmEsNVeoSPS8P9IBa3hVsiCBK3978-IWONJs5u3ZFRsBmK6rs8ux2pwtbKLuG9WJJ3HynGorp/s1600/Evola1.jpg)
Fig. 1. Distinción, morbilidad y mortalidad después de la infección MA- EBOV en líneas de ratones CC- RIX . (A) Porcentaje de comenzar el peso corporal más de curso de la infección en susceptibles (cuadrados rojos) y los ratones resistentes ( círculos azules). Los datos mostrados son la media ± SEM de cinco ratones por línea CC- RIX . (B) Curva de supervivencia de Kaplan- Meier para los susceptibles (rojo ) y resistente ( azul) ratones. Cinco ratones fueron utilizados para cada línea CC- RIX . (C a F) Aspecto macroscópico de hígado en la necropsia en no infectada susceptible ( C) y (D) los ratones resistentes , y en el día 5 post- infección en susceptible ( E) y (F) los ratones resistentes.
En el
hígado y bazo de ambas líneas de ratones, se observaron niveles equivalentes de
ARN viral (Fig. 2, A y B). Sin embargo, se observó 1-2 Logs de niveles más
altos de virus infeccioso en el hígado y el bazo susceptibles en comparación
con el hígado y el bazo resistentes después de la titulación del virus por
ensayo de formación de foco cuando la producción de virión infeccioso
detectable se convirtió en el día 3 (Fig. 2 , C y D) , lo que sugiere que la
resistencia puede estar asociada con un defecto en el ensamblaje del virión, la
secreción, u otros procesos de post-transcripcionales. Se confirmó este
hallazgo tiñendo secciones de hígado de los ratones susceptibles y resistentes
en el día 5 pi para VP40, la proteína de la matriz viral. Hemos observado sustancialmente
menor tinción VP40 en el hígado resistente (Fig.2, E y F) en comparación con
hígado susceptible (Fig. 2, G y H , y la fig. S3). Análisis de secuencias no
mostró cambios de nucleótidos entre los genomas de virus, ya sea en línea, lo
que indica que estos efectos no pueden atribuirse fácilmente a la selección de
cuasi-especies con aptitud viral diferente (Tabla S1). A pesar de las
diferencias significativas en los títulos de virus infecciosos entre las dos
líneas de ratones, se observó un nivel similar de la inflamación y apoptosis en
el bazo y el hígado, aunque las dos líneas muestran distinta histopatología
(figs. S4 a S6). A pesar de tropismo de órganos similares, infección por el
virus se produjo en diferentes tipos de células hepáticas en las dos líneas de
ratón. Ratones susceptibles tenía antígeno viral en esencialmente todos los
hepatocitos ( Fig. 2F y tabla S2 ), mientras que el antígeno viral resistente a
los ratones fue restringida a las células que carecen de la morfología de los
hepatocitos típica, las células endoteliales más probable y células de Kupffer
(Fig. 2G), consistente con bajos infección Reston patogenicidad del virus (15).
Posiblemente en ratones resistentes, respuestas de las células endoteliales y
de los macrófagos hepáticos infectados limitan la producción de virus y
controlar la inflamación sistémica y la coagulopatía. La infección hepática
generalizada en ratones susceptibles puede explicar la forma en que ambos
producen una mayor cantidad de virus infecciosos e inducir vías de la
coagulación desregulados.
![](https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEhTqI3weRj5yaUw1ZWVSij3IWDS_MMIm5Gs0KaQFTKHRz-kWNROlpIYQ1Z5dXYgxtZFBC5KSQtGqyZa0IfS75VMiFErqOLwfiuts0WWStFQOgu5hL5sZMB1Aatu082qYnRfDeSeBAW1dGqe/s280/evola2.jpg)
Fig. 2.Replicación MA- EBOV en líneas de ratones CC- RIX .
(A y B) en tiempo real PCR cuantitativa que muestra la expresión de los genomas
MA- EBOV relativos a ratón 18S rRNA en el bazo (A) y el hígado (B). Los datos
mostrados son la media ± SEM de tres ratones por punto de tiempo por línea RIX
. (C y D) Titulación del infecciosa MA- EBOV en homogeneizados de órganos de
bazo (C) y el hígado (D) cuantificada como enfoque unidades por mililitro de
conformación. Ningún virus infeccioso fue detectado antes del día 3 pi Los
datos mostrados son la media ± SEM de dos experimentos utilizando 2-3 ratones
por punto de tiempo por línea CC- RIX . (E a H) Tinción inmuno-histoquímica
para VP40 en resistente hígado [(E) y (F )] y el hígado susceptible [( G) y (H
)] . La flecha indica la morfología de los hepatocitos representante ( prueba t
, * P < 0,05 ) .
Hemos
cuantificado el grado de coagulopatía por la medición de los tiempos de
coagulación de la sangre. En los días 5-6 pi, los ratones susceptibles
mostraron prolongación significativamente el tiempo de trombina (TT), tiempo de
protrombina (PTT), y tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA) en
comparación con resistente y ratones C57BL / 6J (Fig. 3 , A a C). Un pico
inicial en los niveles de fibrinógeno en suero en ratones susceptibles en el
día 3 pi fue seguido por una caída precipitada (Fig. 3D) antes de la muerte.
Este aumento puede ser debido a la producción de fibrinógeno compensatorios en
respuesta a la muerte celular hepática y el agotamiento de factor de
coagulación consiguiente, en consonancia con las observaciones de otros modelos
de la EHF en la que la hemorragia severa y coagulopatía típicamente picos
dentro de las 48 horas anteriores a la muerte (3,7)
![](https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgkFmE3BCivC_rIHlzv8UHt81fF2x5Yesxgol-yxlNVPONiCGMQyBvoHxpSGnD_Pfmt5dJKSIy782ESKYexFby71IuZFqWBcShqzXyYdXjxDfwtX6MsPDP-ZKZQO2IeCE659UxNCyoN4_gb/s280/Evola3.jpg)
Fig. 3: La cuantificación de la
coagulopatíay hemorragia en las líneas de ratón CC- RIX . (A a C) Los tiempos
de coagulación en segundos para la trombina (A), la protrombina (B), y
activado de tromboplastina parcial (C) sobre curso de la infección MA- EBOV
. Niveles (D) Suero de fibrinógeno en ratones CC- RIX más de curso de la
infección MA- EBOV . Todos los datos que se muestran son la media ± SEM de
2 experimentos incluyendo 2-5 animales por punto de tiempo. ( ANOVA con
post-hoc HSD de Tukey. * P <0 0="" font="" p="">0>
Se
investigaron las respuestas de acogida transcripción vinculados al resultado de
la enfermedad en las líneas de CC- RIX. Importantes genes expresados
diferencialmente con respecto a las muestras infectadas de manera falsa coincidentes
en el tiempo (valor de p ajustados - FDR < 0,05 ; cambio veces > 1,5 )
tanto en el bazo y el hígado fueron 10-100 veces mayor número de DEG en ratones
susceptibles que los ratones resistentes (Fig . 4 , A y B, y los datos
complementarios 2 y 3 ). Estos datos sugieren que EHF se caracteriza por la
inducción temprana de una respuesta transcripcional de magnitud mayor. En
ratones susceptibles relativos a los ratones resistentes, genes asociados con
la infección EBOV fueron inducidos diferencialmente. A principios de la
infección en los bazos de ratones susceptibles al día pi 1, se observó
enriquecimiento de MAPK p38 y la señalización de ERK, procesos que estimulan la
infección productiva EBOV (16 ,17).
Además se
observó el aumento de expresión de NFkB y la inducción de procesos
proinflamatorios , lo que puede reflejar primeros objetivos de la infección en
los órganos linfoides secundarios . Durante el día 3 p.i. tanto en el hígado y
el bazo, las vías inflamatorias se enriquecieron cada vez más en ratones
susceptibles, como lo hizo vías asociadas con la muerte celular, incluyendo
aquellos asociados con la citotoxicidad y apoptosis en los macrófagos y células
endoteliales. Ambas líneas resistentes y susceptibles indujeron múltiples vías
inmunes en el bazo. Durante el día 5, a pesar de la expresión génica
diferencial alcanzó su punto máximo en ambas líneas, los conjuntos de genes
implicados eran distintos y probablemente reflejan diferentes cursos de la
enfermedad.
![](https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEjfd25pGz9DALEdqTuMaTdQyGDYU6d5xD_WXyTSCqzc795oladN2AawHX4-A6iA5rldpLupAGaiELeh9dEfWk-TVDlIPLjK6gVMub-OzJS-KaFJAX46IKx_ULiOBdtVZe2idJfinYpF8nUk/s280/Ebola4.jpg)
Fig. 4. Las respuestas del huésped distintos asociados con fenotipo
de la enfermedad. (A y B) Número de genes expresados diferencialmente (DEG)
ya sea hasta reguladas (eje y positivo) o hacia abajo-regulada ( eje y negativo
) con respecto a las muestras con infección simulada coincidentes en el tiempo
en el bazo (A) y el hígado (B ).
Se
identificaron los genes expresados diferencialmente únicos a ratones
susceptibles en el hígado y se observó el enriquecimiento en los genes
relacionados con la integridad vascular en los días 3 y 5, incluyendo las
tirosina quinasas endoteliales Tie1 y Tek (Tie 2). Expresión Tie1and Tek estaba
deprimido en comparación con los niveles en los animales con infección simulada
en el día 5, coincidiendo con el inicio de la coagulopatía. Utilizamos el
software Ingenio Pathway Análisis (IPA) para generar redes que predicen la
actividad molecular (18) , y predijo la activación de los procesos asociados a
la diferenciación vascular y la activación endotelial, la inflamación mediada
por IL-6, y el sangrado , y la inhibición de vías asociadas con la integridad
vascular y la regulación inflamatoria en los hígados sensibles ( fig. S7). TIE1
y TEK señalización promover la activación de factores de coagulación, tales
como la trombina (F2), el factor tisular (F3) , y la proteasa receptores 1 , 3
activan , y 4 ( PAR1 / F2R , PAR3 / F2RL2 , PAR4 / F2RL3 ) (19), que se han
implicado de manera mecánica en coagulopatías mediadas por EBOV y otros virus
(4, 20), y son regulados diferencialmente en estos ratones (Fig. S8). Tie1 y
expresión Tek fue elevado consistentemente en los bazos de ratones resistentes,
lo que implica que la regulación de señalización endotelial y fuga vascular
contribuye a la resistencia a la enfermedad en los ratones susceptibles.
En
hígados de ratones resistentes en el día 5, la expresión del gen asociado con
la densidad vascular y la angiogénesis aumentó, lo que sugiere que esta línea
controla eficazmente la fuga vascular, potencialmente a través de la reparación
o el mantenimiento estructural de los vasos sanguíneos. Parece probable que la
restricción de la infección MA- EBOV endoteliales y las células de Kupffer en
ratones resistentes impide la inducción de moléculas específico de hepatocitos
que mejoran la inflamación sistémica, trombocitopenia y coagulopatía.
Se investigaron
los genomas y encontró que los alelos Tie1 a través de los ocho fundadores de
CC son de las tres subespecies Mus
musculus , y son muy
divergentes entre sí ( 21 ) , lo que nos impidió identificar relaciones
significativas entre alelos Tie1 y fenotipo. Por el contrario, los alelos Tek
en el CC- RIX se derivan de sólo dos subespecies: M. m. domesticus y M.
M. musculus , y son muy
diferentes entre sí. Tek alelos distintos se asociaron previamente con
coagulopatías inflamatorios y la disfunción vascular (22-26). En nuestro
análisis preliminar, se identificaron relaciones estadísticamente
significativas entre los alelos subespecíficas Tek y la aparición inicial de la
pérdida de peso ( ANOVA , F2,31 = 5,581 , p = 0,0085 ), los días promedio de
muerte ( ANOVA F2,34 = 10.519 , p = 0,00028 ) , y la mortalidad (ANOVA F2,37 =
8,5553 , p = 0,0008 ) (fig. S9).
Aquí,
reproducido EHF en un modelo de ratón que permitirá la vinculación de los
polimorfismos genéticos específicos a tropismo, la producción de virus infeccioso,
las respuestas de tipo específico de células, y el resultado fenotípico. El
modelo CC proporciona una plataforma única para mapear alelos de
susceptibilidad en el contexto de la patogenia de la EHF, y rápidamente aplicar
estos resultados al desarrollo de productos terapéuticos candidatos y vacunas.
Actividades de detección en curso en ratones CC- RIX identificarán loci genéticos adicionales que contribuyen a la
enfermedad hemorrágica, letalidad, o resistencia a la enfermedad severa.
La frecuencia
de diferentes manifestaciones patológicas a través de las líneas 47 CC- RIX
examinados hasta ahora son similares en variedad y proporción con el espectro
de la enfermedad clínica observada en pacientes con enfermedad del virus Ébola
en el brote de 2014 África Occidental, con síntomas hemorrágicos que aparece en
el 30-50 % de los pacientes (27, 28) . Aunque no podemos descartar la
posibilidad de que los sobrevivientes humanos han inmunidad preexistente a EBOV
o un virus relacionado, nuestros datos sugieren que los factores genéticos
juegan un papel importante en la determinación de evolución de la enfermedad en
individuos no tratados previamente, sin exposición previa o cebado
inmunológico.
Si bien
todavía no hemos proyectado ratones CC- RIX para la susceptibilidad a otras
especies de virus Ébola, anticipamos que íbamos a observar una distribución
similar de fenotipos patógenos después de la infección con virus que son
capaces de replicarse en ratones. El actual brote de 2014 África Occidental es
causada por la misma especie del virus Ébola como la MA- EBOV utilizado en este
artículo. También hay similitudes en el espectro de la enfermedad observada en
los ratones CC- RIX infectadas con MA- EBOV y en casos clínicos en el brote
actual. El modelo que se describe en este documento puede ser implementado
rápidamente para identificar marcadores genéticos, realizar estudios muy
detallados de patogénesis, y evaluar estrategias terapéuticas que tienen un
amplio espectro de actividad antiviral contra todos los virus de Ébola Zaire,
incluyendo el virus responsable del brote actual de África Occidental.
Notas y referencias
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RECONOCIMIENTOS
Este
estudio fue apoyado en parte por premios U54 AI081680 , AI109761 U19 , U19 y
AI100625 del Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas de los
Institutos Nacionales de Salud , y por el Programa de Investigación Intramural
del Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas , Institutos
Nacionales de Salud. Micro datos de la matriz han sido depositados en la
Expresión Génica Omnibus (www.ncbi.nlm.nih.gov/geo) (número de acceso
GSE57214 ), y los datos brutos se pueden obtener en https://www.ccebola.org/project/Supplemental
/begin.view. A.L.R. diseñado el estudio, realizado el análisis funcional de los
micro datos de la matriz , y escribió el manuscrito, AO infecciones realizados,
de los controles veterinarios, necropsias , fenotipo evaluado , las muestras
recogidas y procesadas , y el virus se valora a partir de órganos mediante el
ensayo de formación de foco, MTF, MTH, FPMV y R.S.B. sistemas establecidos
para el diseño y la cría de CC- RIX poblaciones de ratones y su utilización para
los estudios de la patogénesis del virus y contribuyeron a la tensión de
selección y análisis de datos, RG realizado la normalización de datos de la
micro matriz , la corrección por lotes, y análisis de expresión diferencial ,
SMK y J.M.W. preparación objetivo realizado y la hibridación de la micro
matriz, RL coordinan atención veterinaria para los animales de experimentación,
DPS realizado tinción histopatológica y analizado los datos de histopatología,
FF, DS, y EH asistida con procedimientos de ratón en alta contención
biológica, MJT y R.G. secuenciación realizada y posterior análisis de ARN
viral, AF realizó el análisis funcional de los datos de micro matriz, PS ARN
viral cuantificado por PCR cuantitativa, M.J.K. editado el manuscrito, H.F. y
M.G.K. contribuido de manera significativa al diseño del estudio, proporcionado
el espacio y la infraestructura para los experimentos y análisis , con la
asistencia en el análisis de datos , y editado el manuscrito.
Afiliaciones de los autores
1 Departamento
de Microbiología de la Universidad de Washington, Seattle, WA , EE.UU.
2 Departamento
de Genética de la Universidad de Carolina del Norte, Chapel Hill, Carolina del
Norte, EE.UU.
3 Montañas
rocosas Rama Veterinaria, Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades
Infecciosas de los Institutos Nacionales de Salud, Laboratorios Montaña
Rocosas, Hamilton, MT, EE.UU.
4 Laboratorio
de Virología, Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas de los
Institutos Nacionales de Salud, Laboratorios Montaña Rocosas, Hamilton, MT,
EE.UU.
5 Departamento
de Microbiología e Inmunología de la Universidad de Carolina del Norte, Chapel
Hill, Carolina del Norte, EE.UU.